溫度對甘藷β-澱粉酶活性影響之研究__臺灣博碩士論文知識加值 ...

β-澱粉酶(β-amylase, EC 3.2.1.2，簡稱BA) 催化水解澱粉鏈之非還原端α-1,4-糖甙鍵，釋出β-maltose而留下β-limit dextrin，分類上屬於外切澱粉酶。

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本論文針對不同品種之甘藷測定BA活性，選擇總活性最高之60℃樣本與對照組進行純化，測定生化性質加以比較，來探討溫度對BA活性之影響。

純化將粗抽液經硫酸銨100%沈澱後，進行製備式電泳可得到相當純的BA。

對照組與60℃樣本對基質澱粉之Km值分別為6.02與2.95%。

酵素最適反應溫度均為60℃，對照組最適反應pH為5，60℃樣本為4.5。

對照組與60℃樣本之活化能分別為3.35與4.2kcal/mol；酵素活性會受到汞、銅、銀離子的抑制，除了汞離子外，60℃樣本對金屬離子的耐受性均較對照組差。

化學修飾劑β-mercaptoethanol、DTT、PMSF中除了DTT外，60℃樣本受到的影響較對照組來得大。

β-amylase(EC3.2.1.2)isanexoamylasethatreleasessuccessivemaltoseunitsfromthenonreducingendofapolysaccharidechainbyhydrolyzingofα-1,4-glucanlinkages.Inthisarticle,BAactivitiesweremeasuredindifferentvarietiesofsweetpotato,andchosethehighesttotalactivitysampleunder60℃treatmentandcontrolsampletopurify.AndputtocomparetheirbiochemicalcharacteristicsandtheeffectsoftemperatureonBAactivity.Crudeextractionprecipitatedbyammoniumsulfate100%thenrunpreparativeelectrophoresiscangetpureenzyme.Kmvaluesforstarchsubstrateofcontrolsampleand60℃samplewereestimatedtobe6.02and2.95%,respectively.Optimaltemperatureforbothsamplesare60℃.OptimalpHvalueforcontrolsampleis5,andfor60℃sampleis4.5.Activationenergyforcontrolsampleand60℃sampleis3.35and4.2kcal/mol,respectively.BAactivitycouldbeinhibitedbyHg2+,Cu2+andAg+.ExceptforHg2+,tolerancetometalionsof60℃sampleislessthancontrolsample.Chemicalmodifiedreagents,includingβ-mercaptoethanol,DTT,PMSFalsoinfluenceBAactivity.ExceptforDTT,influenceofchemicalmodifiedreagentsof60℃sampleismorethancontrolsample. 目錄…………………………………………………………………………...………..Ⅰ縮寫表……………………………………..…………………………………………...III中文摘要…………………………...………………………….………………...……..IVAbstract……...……..…………………………………………..………………………..V第一章緒論………………………………………………………………………...…11.1甘藷…………………………………………………………………………....11.2澱粉酶(Amylase)…………………………………..………………………...21.2.1α-amylase(AA)………………….…………………...…………………31.2.2β-amylase(BA)………………….…………………...………….……...31.3實驗緣起………………………………………………………………….…...9第二章材料與方法………………………………………………………………….102.1實驗材料…………………………………………………………………......102.1.1甘藷…………………..……………………………………………......102.1.2馬鈴薯………………..……………………………………………......102.2實驗藥品………………………………...…………………………………...102.3儀器設備…………………………………………………………………......102.4蛋白質定量法………………………………………………………..............112.5β-澱粉酶活性分析法…………………………………………..……...132.5.1活性分析………………………………………………………..132.5.2澱粉酶活性染色………………………………………………..142.6迷你電泳檢定系統…………………………………………..................152.6.1原態膠體電泳………………………………………….…..…...162.6.2SDS膠體電泳…………………………………………….……192.7膠體染色法………………………………………………………...…...222.7.1CoomassieBrilliantBlueR-250(CBR)染色法………..….…..222.7.2醣蛋白質染色法(過碘酸-硝酸銀法)…………….….….…….232.7.3膠片乾燥法…………………………….….……………………252.8β-澱粉酶的純化…………………………….……….………………...262.8.1粗抽及硫酸銨分劃…………………………………….……….262.8.2製備式電泳與電泳溶離………………………………..………272.9酵素生化性質…………………...……………….………………..……292.9.1酵素反應最適pH值………………………………...…………292.9.2酵素酸鹼安定性........………………….……………...…………292.9.3最適反應溫度…………………...………………………….……302.9.4活化能(Activationenergy,Ea)…………………...………….…302.9.5熱安定性………………………………….…………...…………302.9.6Km值………………….................................................….………302.9.7金屬離子對酵素活性之影響………………………...………….302.9.8化學修飾物對酵素活性之影響…………………………...…….30第三章實驗結果…………………………………………………………………….323.1溫度對β-澱粉酶活性之影響……….……………………………………….323.1.1實驗流程…………………………………………...………………...323.1.2溫度對不同品種甘藷BA之影響…….…………..………….….....323.1.3甘藷與馬鈴薯中BA含量之對照…………………………….……..333.1.4不同升溫處理方式對甘藷BA活性之影響………………….……..343.2β-澱粉酶之純化………………………………………………...…….….....343.2.1純化流程………………………….…………………….....................343.2.2膠片染色結果………………………………………………....……..363.3溫度對β-澱粉酶生化性質之影響…….................………………….……...373.3.1酵素反應最適pH值………………………………...….……...373.3.2酵素酸鹼安定性........………………….……………...….……...373.3.3最適反應溫度…………………...………………………..……...373.3.4活化能………………………….…………………...…….……...373.3.5熱安定性………………………………….…………...…….…...393.3.6酵素動力學研究...…….................................................…….…...393.3.7金屬離子對酵素活性之影響………………………...……….…403.3.8化學修飾物對酵素活性之影響…….…………………...………40第四章討論與展望………………………………………………………………….424.1溫度對β-澱粉酶活性之影響………………………………………..….......424.2β-澱粉酶之純化……………………………………………….....................434.3溫度對β-澱粉酶生化性質之影響…...…………………………………......444.4未來展望…….………………………………….............................................45結果圖表集…………………………………………………………………………….47參考文獻……………………………………………………………………………….69 AnnYG,IizukaM,MinamuraN(1989)Evidenceforexistenceofanactivemonomerofsweetpotatoβ-amylase.Agric.Biol.Chem.53(11):3109-3110ArrudaEJ,SantanaCC(2003)Phenylboronate-chitosanresinsforadsorptionofbeta-amylasefromsoybeanextracts.ApplBiochemBiotechnol105-108:829-42BabaT,KainumaK(1987)Partialhydrolysisofsweetpotatostarchwithβ-amylase.Agric.Biol.Chem.519(5):1365-1371BaileyJM,FrenchD(1956)Thesignificanceofmultiplereactionsinenzyme-polymersystems.J.Biol.Chem.226:1-14BeckE,ZieglerP(1989)Biosynthesisanddegradationofstarchinhigherplants.AnnuRevPlantPhysiolPlantMo1Biol40:95-117BernfeldP(1955)Amylases,aandβ.MethodsEnzymol1:149-158ChangC,LiouH,TangH,SungH(1996)Activation,purificationandpropertiesofβ-amylasefromsweetpotatoes(Ipomoeabatatas)Biotechnol.Appl.Biochem.24:13-18ChapmanGW,PallasJEJr,MendicinoJ(1972)Thehydrolysisofmaltodextrinsbyaβ-amylaseisolatedfromleavesofViciafaba.Biochem.Biophys.Acta.276:491-507DoehlertDC,DukeSH(1983)Specificdeterminationofα-amylaseactivityincrudeplantextractscontainingβ-amylase.PlantPhysiol71:229-234FanML(1975)Partialpurificationandpropertiesofpotatobeta-amylase.Taiwania20:132-138GertlerA,BirkY(1965)Purificationandcharacterizationofaβ-amylasefromSoyabeans.Biochem.J.95:621-627GieseH,HejgaardJ(1984)Synthesisofsalt-solubleproteinsinbarley,pulselabelingstudyofgrainfillinginliquid-cultureddetachedspikes.Planta161:172-177HehreEJ,KitahataS,BrewerCF(1986)Catalyticflexibilityofglycosylases.Thehydrationofmaltalbybeta-amylasetoform2-deoxymaltose.J.Biol.Chem.261:2147-2153IrshadM,SharmaCB(1986)Determinationofβ-amylaseinpresenceofα-amylase.Ind.J.Biochem.Biophys23:288-290JainN,DhawanK,MalhotraS,SinghR(2003)Biochemistryoffruitripeningofguava(PsidiumguajavaL.):compositionalandenzymaticchanges.PlantFoodsforHumanNutrition58:309–315LaoNT,SchoneveldO,MouldRM,HibberdJM,GrayJC,KavanaghTA(1999)AnArabidopsisgeneencodingachloroplast-targetedbeta-amylase.PlantJ.20:519-527LeeEYC(1971)Theactionofsweetpotatoβ-amylaseonglycogenandamylopectin:Formationofanovellimitdextrin.Arch.Biochem.Biophys.240(2):757-767LizottePA,Henson,DukeSH(1990)Purificationandcharacterizationofpeaepicotylβ-amylase.PlantPhysiol.92:615-621MonroeJD,PreissJ(1990)Purificationofaβ-amylasethataccumulatesinArabidopsisthailandmutantsdefectiveinstarchmetabolism.PlantPhysiol.94:1033-1039NakamuraK,OhtoM,YoshidaN(1991)Sucrose-inducedaccumulationofβ-amylaseoccursconcomitantwiththeaccumulationofstarchandsporamininleaf-petiolecuttingsofsweetpotato.PlantPhysiol.96:902-909NielsenT,DeitingU,StittM(1997)Aβ-amylaseinpotatotubersisinducedbystorageatlowtemperature.PlantPhysiol113:503-510RobytJF(1984)Enzymesinthehydrolysisandsynthesisofstarch.In“Starch”2nded,WhistlerRL,BemillerJN,PaschallEF(Eds.)AcademicPressInc,NewYork,pp.87-123SawaiJ,NakaiT,HashimotoA,ShimizuM(2004)Acomparisonofthehydrolysisofsweetpotatostarchwithβ-amylaseandinfraredradiationallowspredictionofreducingsugarproduction.InternationalJournalofFoodScienceandTechnology39:967-974SharmaA,SharmaS,GuptaMN(2000)Purificationofwheatgermamylasebyprecipitation.ProteinExpressionandPurification18:111-114SharmaCB,GoelM,IrshadM(1978)Myoinositolhexaphosphateasapotentialinhibitorofα-amylases.Phytochemistry17:201-204TeotiaS,GuptaMN(2001)Reversiblysolublemacroaffinityligandinaqueoustwo-phaseseparationofenzymes.JChromatogrA923(1-2):275-80TeotiaS,GuptaMN(2002)Magnetite-alginatebeadsforpurificationofsomestarchdegradingenzymes.MolBiotechnol20(3):231-7TeotiaS,KhareSK,GuptaMN(2001)Anefficientpurificationprocessforsweetpotatobeta-amylasebyaffinityprecipitationwithalginate.EnzymeandMicrobialTechnology28:792-795ThomaJA,SpradlinJE,DygertS(1971)Plantandanimalamylase.InPDBoyer,ed,Theenzyme,Ed.3,Academicpress,NewYork,Vol5.115-189ThomaJA,WakimJ,StewartL(1963)Comparisonoftheactivesitesofalphaandbetaamylases.Biochem.Biophys.Res.Commun.12:350-355WangQ,MonroeJ,SjolundRD(1995)Identificationandcharacterizationofaphloem-specificβ-amylase.PlantPhysiol109:743-750WangQ,MonroeJ,SjolundRD(1995)Identificationandcharacterizationofaphloem-specificbeta-amylase.PlantPhysiol.109:743-750WangSM,LiuWL,EimertK,ChenJ(1996)Phytohormone-regulatedβ-amylasegenesexpressioninrice.PlantMol.Biol.31:975-982YamamotoT(1995)-b,In:TheamylaseresearchsocietyofJapan(ed)Enzymechemistryandmolecularbiologyofamylasesandrelatedenzymes.YamasakiY(2003)β-amylaseingerminatingmilletseeds.Phytochemistry64:935–939YoungGH,ChenHM,LinCT,TsengKC,WuJS,JuangRH(2006)Site-specificphosphorylationofL-formstarchphosphorylasebytheproteinkinaseactivityfromsweetpotatoroots.Planta223:468–478ZieglerP,BeckE(1986)Exoamylaseactivityinvacuolesisolatedfrompeaandwheatleafprotoplasts.PlantPhysiol82:1119-1121莊榮輝(1985)水稻蔗糖合成酶之研究。

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2. 王嘉陵（2004）。

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課程與教學季刊，7（1），139-152。

3. 沈姍姍（2005）。

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教育資料與研究，65，17-34。

4. 林佩璇（2000）。

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研習資訊，17（4），36-41。

5. 林偉人（1999）。

淺論學校本位課程發展。

國教之友，51（2），3-13。

6. 郭昭佑（2000）。

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教育研究資訊，8（6），16-34。

7. 徐超聖、楊美惠（2005）。

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國民教育，45，4，頁7-13。

8. 秦夢群（2005）。

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教育研究月刊，136，106-118。

9. 秦麗花（2001）。

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10. 陳昆仁（2003）。

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