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指導教授: 林季千. 指導教授(外文):, Chi-Chen Lin. 學位類別: 碩士. 校院名稱: 國立中興大學. 系所名稱: 生物醫學研究所. 論文出版年: 2012. 語文別: 中文. 資料載入處理中... 跳到主要內容 臺灣博碩士論文加值系統 ::: 網站導覽| 首頁| 關於本站| 聯絡我們| 國圖首頁| 常見問題| 操作說明 English |FB專頁 |Mobile 免費會員 登入| 註冊 功能切換導覽列 (167.99.71.17)您好！臺灣時間：2021/12/2718:10 字體大小：       ::: 詳目顯示 recordfocus 第1筆/ 共1筆  /1頁 論文基本資料 摘要 外文摘要 目次 參考文獻 紙本論文 QRCode 本論文永久網址: 複製永久網址Twitter研究生:鍾婷雯研究生(外文):Ting-WenChung論文名稱:利用細胞外及異種移植動物模式探討重組人類干擾素-gamma之抗肺癌能力論文名稱(外文):AntitumorActivitiesofRecombinantHumanInterferon(IFN)-gammainVitroandinXenograftAnimalModelsforLungCancer指導教授:林季千指導教授(外文):Chi-ChenLin口試委員:朱清良、林民昆口試日期:2012-06-22學位類別:碩士校院名稱:國立中興大學系所名稱:生物醫學研究所學門:生命科學學門學類:生物化學學類論文種類:學術論文論文出版年:2012畢業學年度:100語文別:中文論文頁數:66中文關鍵詞:干擾素、肺癌、凋亡、色胺酸外文關鍵詞:interferon、lungcancer、apoptosis、tryptophan相關次數: 被引用:0點閱:187評分:下載:0書目收藏:0 干擾素-gamma(IFN-gamma)可調控細菌感染和自體免疫疾病的反應，並且其為一重要角色為腫瘤抑制者。

在本篇研究中，我們將探討干擾素-gamma在肺癌細胞中之抗腫瘤能力及機制。

從我們的結果中發現，干擾素-gamma可隨劑量之遞增而使細胞毒殺作用增加，並且造成肺癌細胞膜上磷脂絲氨酸的累積並活化caspase-8,-9,-3，因此我們推論干擾素-gamma可造成肺癌細胞凋亡之能力，並且發現當干擾素-gamma處理肺癌細胞後，可造成BID蛋白被裁切以及粒線體中細胞色素c(cytochromec)的釋放。

由此更進一步觀察其機制時，我們發現干擾素-gamma可誘導死亡受體的表現增加，包含：DR4、DR5和Fas。

此外，干擾素-gamma已知可造成indoleamine2,3-dioxygenase(IDO)的表現，而IDO為tryptophan代謝中的速率限制酵素，可將L-tryptophan代謝為L-kynurenine。

然而從此次研究中，我們利用IDO抑制劑1-L-methyl-tryptophan(1-L-MT)，可發現其可抑制干擾素-gamma所誘導之細胞凋亡能力以及DR5之表現。

因此，我們認為IDO在肺癌細胞中的大量表現對於凋亡作用是重要的。

最後，在異種移植模式中，利用腫瘤內注射干擾素-gamma之方式後可以顯著性地抑制H322M生長之能力。

總合以上之發現，我們在干擾素-gamma誘導肺癌細胞凋亡中提供了一個嶄新的分子機制，暗示干擾素-gamma有潛力成為肺癌之抗癌藥物。

IFN-gammamediatesresponsestobacterialinfectionandautoimmunedisease,butitisalsoanimportanttumorsuppressor.Inthisstudy,weinvestigateditsantitumoreffectsandmechanisminhumanlungcancercells.Ourresultsindicatedthatadose-dependentcytotoxiceffectwasfoundinH322MandH226cells,asindicatedbyaccumulationofthemembranephospholipidphosphatidylserineandactivationofcaspase-8,-9,and-3,weconcludedthatIFN-gammapotentiatedinducedapoptosisinhumanlungcancercells.IFN-gammatreatmentalsoinducedBIDcleavageandmitochondrialcytochromecrelease.Whenexaminedforthemechanism,wefoundthatIFN-gammaincreasedtheexpressionofdeathreceptor,includingDR4,DR5,andFas.Moreover,IFN-gammaisalsoknowntocauseexpressionofindoleamine2,3-dioxygenase(IDO),whichistherate-limitingenzymeofthetryptophandegradationpathway,convertsL-tryptophantoL-kynurenine.OurpresentstudyfoundthatinductionofIDOiscriticalforapoptosisinlungcancer,asquenchingofIDObyIDOinhibitor,1-L-methyl-tryptophan(1-L-MT)abolishedtheIFN-gammainducedapoptosisandDR5.Finally,intratumoraladministrationofIFN-gammasignificantlysuppressedthegrowthofs.c.H322Mcellsinxenograftmodels.Overall,ourpresentstudyprovidedinsightsintothemolecularmechanismsunderlyingIFN-gammainducedapoptosisinlungcancercellsandrenderedthisproteinapotentialanticancerdrugforlungcancer. 中文摘要..........................................................iAbstract..........................................................ii緒論一、肺癌......................................................1二、干擾素之簡介..............................................2三、IFN-gamma與腫瘤之相關性................................2四、細胞凋亡.................................................3研究目的與動機...................................................6材料與方法一、細胞培養..................................................7二、細胞存活率分析(MTTassay)................................10三、流式細胞儀分析細胞週期....................................11四、細胞凋亡分析(AnnexinV/PIassay)............................12五、粒線體膜電位之檢測........................................12六、粒線體中cytochromec釋放之偵測............................13七、細胞表面分子之蛋白表現偵測................................14八、細胞內Reactiveoxygenspecies(ROS)之偵測.....................15九、細胞內鈣離子之偵測........................................15十、酵素連結免疫吸附法(ELISA).................................16十一、抽取totalRNA...........................................18十二、反轉錄反應..............................................19十三、Real-timePCR............................................20十四、西方墨點法..............................................22十五、動物實驗................................................26結果一、確認IFN-gamma於肺癌細胞中IFN-gamma訊息路徑的活化作用28(1)觀察肺癌細胞H226及H322M中，IFN-gammaReceptor的表現28(2)確認IFN-gamma與IFN-gammareceptor交互作用後，所造成路徑的活化反應...............................................28二、IFN-gamma對於肺癌細胞和非癌細胞之生長作用的影響.........28(1)IFN-gamma抑制肺癌細胞生長.............................28(2)IFN-gamma對於一般細胞不具有抑制能力...................29三、IFN-gamma誘導肺癌細胞H322M及H226細胞凋亡............29四、IFN-gamma誘導肺癌細胞H322M及H226粒線體膜電位之改變..30五、IFN-gamma誘導細胞表面上的死亡受體(deathreceptor)增加.....32六、IFN-gamma不影響FasL、TRAIL表現.......................32七、IFN-gamma誘導細胞中idoleamine2,3-dioxygenase(IDO)蛋白的增加..............................................................33八、IFN-gamma所誘導的IDO蛋白可以調控細胞的存活率..........33(1)評估IDO在肺癌細胞中所扮演的角色.......................33(2)評估IDO如何影響肺癌細胞的存活率.......................34九、藉由調控IDO代謝路徑可抑制IFN-gamma所誘導肺癌細胞之凋亡34十、藉由調控IDO代謝途徑可抑制IFN-gamma所誘導之DR5表現....35十一、IFN-gamma在體內模式可抑制肺癌細胞H322M的生長........35討論..............................................................37參考文獻..........................................................41圖表圖一、確認肺癌細胞株H322M及H226對於IFN-gamma具有敏感性...46圖二、IFN-gamma的刺激下對肺癌細胞株產生毒殺反應..............47圖三、IFN-gamma造成H226及H322MsubG1%增加................48圖四、IFN-gamma造成H226及H322M細胞凋亡反應，並誘發caspase活化以及PARP剪切表達..........................................49圖五、IFN-gamma透過caspase8的活化誘導細胞凋亡，並影響粒線體膜電位改變及粒線體內膜中cytochromec的釋放........................50圖六、證實IFN-gamma主要經由casapse8路徑誘導細胞凋亡.........52圖七、ROS和鈣離子未參與IFN-gamma所誘導的細胞凋亡反應.......53圖八、IFN-gamma可誘導細胞表面deathreceptor的表現增加.........54圖九、IFN-gamma不會影響deathreceptor的ligand表現.............55圖十、IFN-gamma可促進Fas和TRAIL所誘導的細胞凋亡反應.......57圖十一、IFN-gamma可誘導細胞內IDO的RNA和蛋白質的表現量增加58圖十二、透過調控IDO代謝途徑，可以降低IFN-gamma對肺癌細胞的毒殺作用..........................................................59圖十三、透過調控IDO代謝途徑，可降低IFN-gamma所誘導的細胞凋亡作用............................................................60圖十四、透過調控IDO代謝途徑，可降低IFN-gamma所造成的粒線體膜電位的改變......................................................61圖十五、透過調控IDO，可減少IFN-gamma所誘導細胞凋亡蛋白質的表現，並且增加抗凋亡蛋白質的表現....................................62圖十六、透過抑制IDO，可減少IFN-gamma所誘導DR5的表現......64圖十七、體內試驗證明IFN-gamma可抑制肺癌細胞H322M的生長....65圖十八、IFN-gamma造成肺癌細胞凋亡之路徑圖....................66 1.MolinaJR,YangP,CassiviSD,SchildSE,AdjeiAA.Non-smallcelllungcancer:epidemiology,riskfactors,treatment,andsurvivorship.MayoClinProc.2008May;83(5):584-94.2.SocinskiMA.Antibodiestotheepidermalgrowthfactorreceptorinnonsmallcelllungcancer:currentstatusofmatuzumabandpanitumumab.ClinCancerRes.2007Aug1;13(15Pt2):s4597-6013.BaeHM,LeeSH,KimTM,KimDW,YangSC,WuHG,KimYW,HeoDS.Prognosticfactorsfornon-smallcelllungcancerwithbonemetastasisatthetimeofdiagnosis.LungCancer.2012Jun4.4.NambaY,KijimaT,YokotaS,NiinakaM,KawamuraS,IwasakiT,TakedaY,KimuraH,OkadaT,YamaguchiT,NakagawaM,OkumuraY,MaedaH,ItoM.Gefitinibinpatientswithbrainmetastasesfromnon-small-celllungcancer:reviewof15clinicalcases.ClinLungCancer.2004Sep;6(2):123-8.5.GopalR,StarkschallG,TuckerSL,CoxJD,LiaoZ,HanusM,KellyJF,StevensCW,KomakiR.Effectsofradiotherapyandchemotherapyonlungfunctioninpatientswithnon-small-celllungcancer.IntJRadiatOncolBiolPhys.2003May1;56(1):114-20.6.NumicoG,GarroneO,DongiovanniV,SilvestrisN,ColantonioI,DiCostanzoG,GranettoC,OccelliM,FeaE,HeouaineA,GascoM,MerlanoM.Prospectiveevaluationofmajorvasculareventsinpatientswithnonsmallcelllungcarcinomatreatedwithcisplatinandgemcitabine.Cancer.2005Mar1;103(5):994-9.7.GalanoG,CaputoM,TecceMF,CapassoA.Efficacyandtolerabilityofvinorelbineinthecancertherapy.CurrDrugSaf.2011Jul;6(3):185-93.428.EdelmanMJ,ShvartsbeynM.Epothilonesindevelopmentfornon--small-celllungcancer:novelanti-tubulinagentswiththepotentialtoovercometaxaneresistance.ClinLungCancer.2012May;13(3):171-80.9.SchroderK,HertzogPJ,RavasiT,HumeDA.Interferon-gamma:anoverviewofsignals,mechanismsandfunctions.JLeukocBiol.2004Feb;75(2):163-89.10.KondoY,UenoY,NinomiyaM,TamaiK,TanakaY,InoueJ,KakazuE,KobayashiK,KimuraO,MiuraM,YamamotoT,KobayashiT,IgarashiT,ShimosegawaT.SequentialimmunologicalanalysisofHBV/HCVco-infectedpatientsduringPeg-IFN/RBVtherapy.JGastroenterol.2012May16.11.TomaoS,MozzicafreddoA,RaffaeleM,RomitiA,PapòMA,CampisiC.[Interferonsinthetherapyofsolidtumors].ClinTer.1995Aug-Sep;146(8-9):491-502.12.LingeC,GewertD,RossmannC,BishopJA,CroweJS.Interferonsystemdefectsinhumanmalignantmelanoma.CancerRes.1995Sep15;55(18):4099-104.13.StranderH.Interferonsandosteosarcoma.CytokineGrowthFactorRev.2007Oct-Dec;18(5-6):373-80.Epub2007Aug1.14.WallL,BurkeF,BartonC,SmythJ,BalkwillF.IFN-gammainducesapoptosisinovariancancercellsinvivoandinvitro.ClinCancerRes.2003Jul;9(7):2487-96.15.BünekerCK,YuR,DeediganL,MohrA,ZwackaRM.IFN-γcombinedwithtargetingofXIAPleadstoincreasedapoptosis-sensitisationofTRAILresistantpancreaticcarcinomacells.CancerLett.2012Mar28;316(2):168-77.16.AhnEY,PanG,VickersSM,McDonaldJM.IFN-gammaupregulatesapoptosis-relatedmoleculesandenhancesFas-mediatedapoptosisinhumancholangiocarcinoma.IntJCancer.2002Aug1;100(4):445-51.4317.BadieB,SchartnerJ,VorpahlJ,PrestonK.Interferon-gammainducesapoptosisandaugmentstheexpressionofFasandFasligandbymicrogliainvitro.ExpNeurol.2000Apr;162(2):290-6.18.InabaH,GlibeticM,BuckS,RavindranathY,KaplanJ.Interferon-gammasensitizesosteosarcomacellstoFas-inducedapoptosisbyup-regulatingFasreceptorsandcaspase-8.PediatrBloodCancer.2004Dec;43(7):729-36.19.KerrJF,WyllieAH,CurrieAR.Apoptosis:abasicbiologicalphenomenonwithwide-rangingimplicationsintissuekinetics.BrJCancer.1972Aug;26(4):239-57.20.DijkstraCD.[NobelPrizeforPhysiologyorMedicine2002isawardedforresearchintothegeneticregulationoforgandevelopmentandprogrammedcelldeath].NedTijdschrGeneeskd.2002Dec28;146(52):2525-7.Dutch.21.PobezinskayaY,LiuZG.TheroleofTRADDindeathreceptorsignaling.CellCycle.2012Mar1;11(5).22.YerbesR,PalaciosC,López-RivasA.ThetherapeuticpotentialofTRAILreceptorsignallingincancercells.ClinTranslOncol.2011Dec;13(12):839-47.23.LavrikIN,KrammerPH.RegulationofCD95/FassignalingattheDISC.CellDeathDiffer.2012Jan;19(1):36-41.24.JendrossekV.Theintrinsicapoptosispathwaysasatargetinanticancertherapy.CurrPharmBiotechnol.2012Jun1;13(8):1426-38.25.FoggVC,LanningNJ,MackeiganJP.Mitochondriaincancer:atthecrossroadsoflifeanddeath.ChinJCancer.2011Aug;30(8):526-39.26.OlaMS,NawazM,AhsanH.RoleofBcl-2familyproteinsandcaspasesintheregulationofapoptosis.MolCellBiochem.2011May;351(1-2):41-58.4427.RamanaCV,GilMP,SchreiberRD,StarkGR.Stat1-dependentand-independentpathwaysinIFN-gamma-dependentsignaling.TrendsImmunol.2002Feb;23(2):96-101.28.GogvadzeV,NorbergE,OrreniusS,ZhivotovskyB.InvolvementofCa2+andROSinalpha-tocopherylsuccinate-inducedmitochondrialpermeabilization.IntJCancer.2010Oct15;127(8):1823-32.29.KowaltowskiAJ,deSouza-PintoNC,CastilhoRF,VercesiAE.Mitochondriaandreactiveoxygenspecies.FreeRadicBiolMed.2009Aug15;47(4):333-43.30.Croitoru-LamouryJ,LamouryFM,CaristoM,SuzukiK,WalkerD,TakikawaO,TaylorR,BrewBJ.Interferon-γregulatestheproliferationanddifferentiationofmesenchymalstemcellsviaactivationofindoleamine2,3dioxygenase(IDO).PLoSOne.2011Feb16;6(2):e14698.31.LiuXQ,WangX.Indoleamine2,3-dioxygenaseintumorinducedtolerance.ChinMedJ(Engl).2009Dec20;122(24):3072-7.32.WangH,PanK,XiaJC.Interactionofindoleamine-2,3-dioxyagnaseandCD4+CD25+regulatoryTcellsintumorimmuneescape.AiZheng.2009Feb;28(2):184-7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 國圖紙本論文 推文 網路書籤 推薦 評分 引用網址 轉寄                                                                                                                                                                                                                    top 相關論文 相關期刊 熱門點閱論文 1. 薏仁麩皮中防癌及抗發炎活性成分之分離與鑑定 2. 大黃素誘導人類肺腺癌細胞生長抑制及細胞凋亡之分子機轉 3. 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